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人谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)
發(fā)布時(shí)間:2025/12/15瀏覽:288次
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  人谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)

  BS-9843 人谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)ELISA試劑盒

  產(chǎn)品概述

  本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)?,用于體外定量檢測(cè)人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液及細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)濃度。GPX4是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶家族的關(guān)鍵成員,通過(guò)催化還原型谷胱甘肽(GSH)清除脂質(zhì)過(guò)氧化物,在抑制鐵死亡、維持細(xì)胞膜完整性及抗氧化應(yīng)激中發(fā)揮核心作用?。

  檢測(cè)原理

  雙抗體夾心法?:包被抗體與樣本中GPX4結(jié)合,生物素標(biāo)記抗體形成復(fù)合物,辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素催化顯色反應(yīng),顯色強(qiáng)度與樣本中GPX4濃度成正比?。

  特異性?:可特異性識(shí)別GPX4,與類似物無(wú)交叉反應(yīng),確保檢測(cè)準(zhǔn)確性?。

  試劑盒組成

  組分 規(guī)格/描述

  預(yù)包被微孔板 96孔板,含抗人GPX4抗體

  標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉,重組人GPX4蛋白,臨用前用稀釋液復(fù)溶

  生物素標(biāo)記抗體 液體,HRP標(biāo)記抗人GPX4抗體

  顯色底物(TMB) 液體,3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺溶液

  終止液 2M硫酸溶液

  洗滌緩沖液 20×濃縮液,含吐溫-20

  樣本稀釋液 緩沖液,用于稀釋高濃度樣本

  封板膜 透明,用于微孔板密封

  樣本處理與保存

  樣本類型?:血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等?。

  處理方法?:

  血清/血漿:室溫凝固后離心(3000 rpm,10分鐘),取上清。

  組織勻漿:用生理鹽水制備10%勻漿液,離心取上清。

  細(xì)胞裂解液:裂解后離心(15000 rpm,10分鐘),取上清。

  保存條件?:短期(≤7天)2-8℃保存,長(zhǎng)期(>7天)需分裝-20℃凍存,避免反復(fù)凍融?。

  操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:用樣本稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品依次稀釋為1000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL,0 pg/mL為空白對(duì)照?。

  加樣?:每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。

  洗滌?:棄去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)5次,拍干。

  加生物素標(biāo)記抗體?:每孔加入100 μL生物素標(biāo)記抗體,37℃孵育60分鐘。

  加顯色底物?:每孔加入90 μL TMB底物,37℃避光孵育15-30分鐘。

  終止反應(yīng)?:每孔加入50 μL終止液,混勻后立即測(cè)定吸光度。

  結(jié)果計(jì)算

  儀器設(shè)置?:酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm(參考波長(zhǎng)630 nm)。

  數(shù)據(jù)處理?:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算,乘以稀釋倍數(shù)?。

  靈敏度?:7.69 pg/mL,檢測(cè)范圍15.62-1000 pg/mL?。

  注意事項(xiàng)

  交叉反應(yīng)?:不與GPX1、GPX2、GPX3等類似物發(fā)生交叉反應(yīng)?。

  操作規(guī)范?:

  洗滌需干凈,避免殘留液體影響結(jié)果。

  顯色時(shí)間控制在15-30分鐘,避免過(guò)度顯色導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差。

  樣本避免反復(fù)凍融,以防蛋白降解。

  質(zhì)量控制?:建議每批次實(shí)驗(yàn)設(shè)置雙孔復(fù)測(cè),CV值<10%為合格?。

  儲(chǔ)存條件

  未開(kāi)封試劑盒:2-8℃避光保存,有效期6個(gè)月。

  開(kāi)封后:標(biāo)準(zhǔn)品、抗體、底物等組分按說(shuō)明書(shū)要求分裝保存,避免反復(fù)凍融?。

  本說(shuō)明書(shū)僅用于科研用途,不適用于臨床診斷。操作前請(qǐng)仔細(xì)閱讀完整說(shuō)明書(shū),并遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。

  注:供科研使用,以上資料供參考。

  人谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。

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